紫外可見分光光度計的工作原理：基于朗伯-比耳(Lambert-Beer)定律，即物質在一定濃度下的吸光度與它的吸收介質的厚度呈正比。 
 

通常表述為：

當一束平行的單色光通過某一均勻的有色溶液時，溶液的吸光度與溶液的濃度和光程的乘積成正比，其數學表達式如下： 

A=-lg（ It/I0 ）= - lgT= =εbC

式中，A 為吸光度；

I0為入射的單色光強度；

It為透射的單色光強度；

T為物質的透射率；

ε為摩爾吸光系數（L·mol-1·cm-1）；

b為被吸收層厚度（cm），即比色皿的光程；

C為物質的摩爾濃度（mol·L-1）。